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线粒体染色试剂盒的知识点有必要和大家说说

更新时间:2018-12-22      点击次数:1515
    线粒体染色试剂盒的固定和透化,染色结束后,利用培养液或缓冲液清洗细胞。小心吸走清洗液,换用新鲜配制且预热的含2-4%甲醛的缓冲液或培养液进行细胞固定。清洗细胞:吸除固定液,用适当缓冲液冲洗细胞数次。细胞透化(可选)可将已固定的细胞直接加入含有去污剂如Triton X-100的缓冲液中孵育。透化结束后,用缓冲液清洗细胞即可进行后续ICC实验。一般用含0.2% Triton X-100的PBS孵育细胞10分钟可以达到良好的透化效果。还可利用预冷的丙酮透化5 分钟,之后用PBS清洗细胞。经验证,即使后继没有进一步的抗体标记,丙酮透化处理也可降低背景信号。
    细胞染色,对于贴壁细胞,培养皿/培养板准备细胞样本。待细胞生长到合适丰度,吸除培养液,加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育15分钟~45分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定,需预实验优化)也可以将细胞置于培养皿中的盖玻片上,加入合适培养基,使其爬片生长,利用新鲜培养基替换上述染色液。若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。荧光显微镜(含合适滤片)或流式细胞仪、荧光酶标仪下观察。zui大激发/发射波长为579 / 599nm。或者进行后续的固定和透化步骤,对于悬浮细胞,离心,吸除上清。利用37℃预热的探针工作液重悬细胞,于生长状态下孵育30分钟~2小时(具体时间需根据细胞类型而定,需预实验优化)离心,吸除染色液,加入新鲜培养液重悬细胞。置于荧光镜下观察。或流式细胞仪、荧光酶标仪检测。zui大激发/发射波长为579 / 599nm。或者进行后续的固定和透化步骤。
    线粒体染色试剂盒是一种双膜结合的细胞器,存在于大多数真核细胞中。线粒体的功能是提供细胞能量。此外,线粒体参与其他任务,如信号传递、细胞分化和细胞死亡,以及维持对细胞周期和细胞生长的控制。线粒体与多种人类疾病有牵连,包括线粒体疾病、心脏疾病、心力衰竭和孤独症。线粒体可能在这些细胞过程中发挥重要作用。
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